Đoạn DNA đích và thể truyền (ベクター - như プラスミド) được cắt bằng cùng một loại enzyme cắt giới hạn (制限酵素). Sau đó, dùng enzyme DNA ligase (DNAリガーゼ) để nối chúng lại thành DNA tái tổ hợp (組換えDNA). DNA này được chuyển vào vi khuẩn (遺伝子導入) để nhân bản (クローニング).
PCR gồm 3 bước lặp lại trong mỗi chu kỳ: (1) Biến tính (đổi nếp 95°C) tách 2 mạch DNA, (2) Bắt cặp mồi (khoảng 55-60°C) cho primer gắn vào, (3) Kéo dài (khoảng 72°C) nhờ Taq DNA polymerase. Số lượng đoạn DNA mục tiêu tăng theo cấp số nhân 2^n.
Trong điện di gel (ゲル電気泳動), DNA mang điện tích âm sẽ di chuyển về cực dương. Đoạn DNA ngắn di chuyển nhanh hơn đoạn dài, so sánh với thước đo DNA (DNAサイズマーカー) để biết kích thước. Đưa gen GFP (緑色蛍光タンパク質) gắn với gen mục tiêu tạo protein dung hợp (融合タンパク質) giúp quan sát vị trí biểu hiện gen trong tế bào.
Bội số khuếch đại lý thuyết của đoạn DNA mục tiêu sau 25 chu kỳ phản ứng PCR.
25サイクルのPCR反応後における目的DNA断片の理論上の増幅倍率。
Ví dụ例題
Tính số lượng phân tử DNA mục tiêu được tạo ra từ 1 phân tử DNA khuôn ban đầu qua 25 chu kỳ PCR và giải thích nguyên lý phân tách sản phẩm PCR bằng điện di gel.
Bước 1: Áp dụng công thức tính số lượng đoạn DNA mục tiêu nhân bản qua n chu kỳ PCR: N = 2^n.nサイクルのPCRによって増幅される目的DNA断片数の計算式 N = 2^n を適用する。
Bước 2: Thay n = 25 vào công thức, ta có số phân tử DNA mục tiêu khuếch đại là 2^{25} (tương đương hơn 33 triệu bản sao).式に n = 25 を代入すると、増幅される目的DNA分子数は 2^{25}(約3,300万コピーに相当)となる。
Bước 3: Nạp sản phẩm PCR vào giếng gel của thiết bị điện di (ゲル電気泳動). Do khung đường-phosphate mang điện tích âm, các đoạn DNA di chuyển về cực dương.PCR産物をゲル電気泳動装置のウェルにアプライする。糖-リン酸骨格が負に帯電しているため、DNA断片は陽極に向かって移動する。
Bước 4: Các đoạn DNA có kích thước ngắn gặp ít lực cản của gel hơn nên di chuyển xa hơn, phân tách thành các vạch rõ rệt so với DNA size marker (DNAサイズマーカー).サイズの短いDNA断片ほどゲルの抵抗を受けにくいため遠くまで迅速に移動し、DNAサイズマーカーと比較して明瞭なバンドとして分離される。
Phản ứng PCR khuếch đại số lượng đoạn DNA lên 2^{25} lần sau 25 chu kỳ, và điện di gel giúp kiểm tra chính xác kích thước của sản phẩm khuếch đại đó.PCR反応により25サイクル後にDNA断片数が2^{25}倍に増幅され、ゲル電気泳動によってその増幅産物のサイズを正確に確認できる。
3 câu kiểm tra確認問題 3問
Đã trả lời 0 / 3
1. Thứ tự đúng của các bước trong mỗi chu kỳ của phương pháp PCR (Phản ứng chuỗi Polymerase) là gì?PCR法(ポリメラーゼ連鎖反応法)の各サイクルにおける反応過程の順序として正しいものはどれか。
2. Mô tả nào sau đây đúng nhất về phương pháp điện di DNA trên gel?DNAのゲル電気泳動法に関する記述として最も適切なものはどれか。
3. Mục đích nào sau đây đúng nhất khi sử dụng protein huỳnh quang xanh (GFP) trong công nghệ sinh học?緑色蛍光タンパク質(GFP)をバイオテクノロジーで利用する目的として最も適切なものはどれか。
Nội dung Trí Lữ viết mới theo JASSO 2026 · nguồn sách riêng tư không được tái xuất bảnJASSO 2026に沿ったTrí Lữの新規教材 · 非公開書籍資料は転載していません